MUESTRAS
SANGRE
- Se le realizan hemocultivo.
- Se recomienda que sea de 20 ml y en procesos de septicemia (bacteriemia + fungemia).
- Muestra → frascos con caldo de nutrientes → Incubación a 37°c → Comprobar el crecimiento bacteriano → subcultivo de 5 a 7 días
LÍQUIDO CEFALORRAQUÍDEO
- Preferible en caso de meningitis.
- Muestra → Centrifugación → Inocular sedimento bacteriano → Tinción gram o amplificación de ácidos nucleicos.
- Otros líquidos: Líquido peritoneal, pleural, sinovial o pericárdico
VÍAS RESPIRATORIAS
- ALTAS: De áreas amigdalinas, faringe posterior o exudados. En caso de epiglotis o senos se obtiene por aspiración directa.
- BAJAS: Pruebas provenientes de expectoración, broncoscopias, aspiración de pared torácica. La presencia de células escamosas indica contaminación por saliva.
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO
Tinción de Gram: Fue ideado como un método inicialmente utilizado para
clasificar a las bacterias en dos grandes grupos. Actualmente es considerado como
una de las pruebas de tinción más utilizadas en los laboratorios de microbiología; ya
que nos permite reconocer bacterias grampositivas y gramnegativas, basándose en
un único principio: la utilización de un primer colorante (el violeta de genciana o
cristal violeta) que tiene mucha afinidad por el peptidoglicano de la pared
bacteriana.
La interpretación de resultados es que las bacterias grampositivas quedan teñidas
de un color azul o violeta intenso debido a que tienen una pared gruesa abundante en
peptidoglucanos (60% - 70%) dispuestos en forma de malla y un protoplasma ácido,
que retienen el tinte violeta básico y el complejo de yodo; mientras que las bacterias
gramnegativas tienen una pared es delgada y por adición de etanol a acetona no
logran retener el colorante principal, pero si retienen el rojo de safranina. Algunos
ejemplos:
- Bacterias grampositivas: “Bacillus anthracis” (responsable del ántrax), “Clostridium botulinum” (causante del botulismo), “Staphylococcus aureus” (causante del síndrome de piel escaldada o enfermedad de Ritter); etc.
- Bacterias gramnegativas: “Neisseria meningitidis” (causante de meningitis), “Escherichia coli” (causante de gastroenteritis), “Salmonella enterica” (causante de gastroenteritis); etc.
Agar TSI (Triple Sugar Iron): Este procedimiento es usado para la
diferenciación de bacilos gram negativos entéricos de otros, se basa en la
fermentación de carbohidratos (sacarosa, lactosa y dextrosa) además de la
producción de sulfhídrico o gases; por ejemplo es usado comúnmente para la
diferenciación de salmonellas y shigelas de otros bacilos entéricos en muestras de
heces.
- Pico alcalino / fondo alcalino (pico rojo / fondo rojo): el microorganismo no realiza fermentación de azúcares; por ejemplo esto se puede evidenciar en el 4 tubo de ensayo, el que se encuentra en el extremo derecho.
- Pico alcalino / fondo ácido (pico rojo / fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta glucosa, se evidencia en el segundo tubo de ensayo de la imagen.
- Pico ácido / fondo ácido (pico amarillo / fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa, se evidencia en el primer tubo de ensayo, el del extremo de la izquierda.
- Si la muestra presenta un ennegrecimiento del medio como el tercer tubo de ensayo de imagen, indica que el microorganismo presente produce ácido sulfhídrico (H2S).
- Por último, si hubiera la presencia de burbujas indica que el microorganismo es productor de gas.
Por otra parte es importante hacer mención que existen algunos límites o complicaciones que pueden surgir si no se toma las medidas adecuadas; por ejemplo, los resultados de la prueba deber ser leídos luego de 18 a 24 horas de incubación, ya que si se hace antes de este tiempo pueden existir falsos positivos como que la acidez generada no sea suficiente para producir el viraje del indicador rojo de fenol del color rojo al amarillo; por otra parte si se lee luego de 24 horas se pueden obtener resultados falsos negativos por consumo de peptonas durante el crecimiento de los microorganismos con la consecuente alcalinidad del medio de cultivo.
Los microorganismos fermentadores de glucosa acidifican el medio y provocan el viraje
del color púrpura al amarillo.
El ambiente ácido favorece la actividad enzimática descarboxilasa y se metaboliza la
lisina a cadaverina elevando el pH del medio de cultivo y tornándolo al color púrpura o
violeta.
Los microorganismos fermentadores de glucosa que no tienen actividad lisina
descarboxilasa, producen un viraje de la totalidad del medio de cultivo al color amarillo.
La generación de sulfuro de hidrógeno, se visualiza por el ennegrecimiento del medio
debido a la formación de sulfuro de hierro.
Medios SIM e Indol: La prueba de SIM se utiliza para detectar la producción de Sulfuro, presencia de Indol
y ver la Motilidad de los organismos. Para ello necesitaremos un agar con cultivo
bacteriano, un medio de cultivo SIM, El reactivo de Kovacs y un asa. Luego de tomar una
colonia bacteriana se debe introducir el asa en el medio de cultivo semisólido en línea
recta hasta el fondo del tubo, esta técnica recibe el nombre de siembra por picadura,
esto nos ayudará a observar la motilidad a partir de esta línea, luego de realizar la
siembra, incubar a 37° por 24 horas Luego de la incubación, añadir una gota de reactivo
kovacs sin que este toque el tubo , este al combinarse con el indol va a formar un anillo
rojo en la superficie lo que nos indica que es positivo a la prueba de Indol, cabe recalcar
que el indol es un compuesto que se genera mediante la desaminación reductiva del
triptófano y esta reacción es llevada a cabo por algunas bacterias que poseen las
enzimas denominadas en su conjunto triptofanasas. Si existe sulfuro va a presenciar
una línea negra en la zona de picadura y por último para una motilidad positiva el
crecimiento de la bacteria se realizará hacia los lados.
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